基于萤光素酶报告基因的检测系统仍是高通量药物筛选中重要而有效的方法。但是待测化合物与萤光素酶报告基因的相互作用导致的假阳性结果会导致不必要的后续工作。 pNLCoI 载体是第二代双报告基因载体系统，能够从同一个 mRNA 同时表达萤火虫萤光素酶(luc2) 和融合有 PEST 去稳定结构域的 NanoLuc® 萤光素酶 (NlucP)。通过来源于猪捷申病毒 -1(porcine teschovirus-1) 的 P2A 序列能够分别检测两种萤光素酶的表达，其原理是 P2A 序列启动了 ribosomal skip，同一启动子可调控获得两种非融合酶的表达，且两种萤光素酶与化合物相互作用不同。当这种技术用于高通量化合物筛选中时，实现了与其中一个萤光素酶直接作用而导致的假阳性化合物能够与同时引起两种萤光素酶反应的真正的有效化合物区别开来。pNLCoI 与 Nano-Glo®Dual-Luciferase®Reporter (NanoDLR™) Assay System 联合使用，这种检测试剂可以在同一样本中先后检测萤火虫和 NanoLuc® 萤光素酶蛋白。两种试剂均能产生半衰期长达2 小时左右的稳定的辉光信号，适用于批量操作检测样本，或者96、384、1536 多孔板模式下进行筛选。